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荧光报告
作者:TIS 杰克森实验室
文章内容
在前面两篇中,我们带大家一起了解了研究免疫细胞和神经细胞常用的Cre工具鼠都有哪些。Cre与flox品系联合使用可以实现非常多样的实验目的,比如在特定组织或细胞敲除/敲低或过表达某一基因、对目标细胞进行谱系示踪、光遗传学调控、化学遗传学调控、神经元兴奋性指示、条件性细胞剔除、或者与病毒搭配使用,对神经元环路进行跨突触示踪等。
本篇将向大家介绍cre工具鼠的应用之——细胞标记和谱系示踪,以及神经生物学和免疫学研究常用的荧光标记小鼠模型。
报告品系
Cre报告品系主要用于评估Cre的表达情况。Cre报告品系中,通常是在 ROSA26或Igs7等安全位点敲入报告基因 (如 GFP/tdTomato/YFP/lacZ/Luciferase等),有时会使用CAG等强启动子以增强表达。在报告基因序列前会添加 “lox-STOP-lox” (LSL) 元件。与Cre品系配繁后,在表达Cre的特定细胞中LSL被切除,使得报告基因的表达启动,从而标记出该细胞。
JAX收录了大量的Cre报告品系。其中荧光报告品系具有多种可变形式,如荧光的种类 (单色、双色、多色等)、荧光蛋白的定位 (细胞质、细胞膜、细胞核、特定细胞器等),可根据不同品系的特征加以选择。
下表列出了一些通用型荧光报告flox品系:
注意事项
一些报告品系在与Cre品系配繁前,可能存在一定的报告基因泄露表达,因此建议设置合理的对照,建立报告基因的基线水平参考值。此外,其中部分报告品系的荧光表达具有细胞核定位或细胞膜定位的特点。如#025106、#029899、#030952、#023537等,荧光表达在细胞核;而#007676的荧光表达在细胞膜上。
神经/免疫细胞荧光标记小鼠模型
上述荧光报告flox品系,可以与各类免疫细胞常用的Cre小鼠品系、神经细胞常用的Cre小鼠品系结合使用,实现特定细胞的荧光标记和谱系示踪。
此外,JAX 也有现成的特定细胞荧光标记的小鼠品系,可直接对某一类免疫/神经细胞进行追踪。
免疫细胞荧光标记品系:
神经细胞荧光标记品系:
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